1. Что такое жидкостная хроматография

1.1. Открытие жидкостной хроматографии. Что обозначает аббревиатура ВЭЖХ. Различные способы реализации жидкостной хроматографии 

Кто придумал слово «хроматография», и что оно обозначает. Каково современное определение хроматографии, и в чем его слабость. Подвижная и неподвижная фазы (ПФ и НФ). Элюирование. Два различных принципа хроматографического разделения: эксклюзионный и адсорбционный.  

Различные виды классификации подтипов ЖХ. Классификация жидкостной хроматографии по назначению. Классификация по техническому способу реализации.

Что обозначает термин «ВЭЖХ» / «HPLC». Три способа прочтения аббревиатуры «HPLC». Почему аббревиатуры UHPLC, UPLC, FPLC не имеют практического смысла. 

Чем жидкостная хроматография похожа на твердофазную экстракцию (ТФЭ), и в чем состоит их основное отличие. Различие и сходство твердофазной экстракции (ТФЭ) и адсорбционной очистки (АО).

1.2. Как работает жидкостной хроматограф 

Принцип работы жидкостного хроматографа. Основные модули хроматографа (HPLC modules). 

Конфигурация жидкостного хроматографа. Стандартные конфигурации и схемы с переключением потоков. Жидкостная система хроматографа. 

Методы детектирования в ВЭЖХ. Устройство оптических детекторов.


2. Хроматограмма

2.1. События разметки 
Базовая линия, дрейф, шум. События разметки (integration events), параметры интегрирования сигнала.

2.2. Критерии ПХС 
Критерии пригодности хроматографической системы (ПХС).

2.3. Пик 

Аналитический сигнал» и «пик». К каким проблемам может привести непонимание разницы между этими терминами. 

Параметры хроматографического пика. Форма пика. Нарушение формы пика. Чем могут быть вызваны нарушения формы пика.

2.4. Селективность 

Селективность для пары пиков. Селективность для группы веществ. Межгрупповая и внутригрупповая селективность. Относительное время удерживания как параметр, не имеющий физического смысла

2.5. Внешний и внутренний стандарты 
Принцип количественного анализа в ВЭЖХ. Зачем нужен внутренний стандарт, и его виды. Почему внутренний стандарт – редкость в ВЭЖХ. Полуколичественный анализ без стандартов. 


3. Хроматографическая система. ВЭЖХ колонка  

3.1. Хроматографическая система как инструмент разделения (separation tool)

Хроматография как необычный физико-химический метод анализа, совершенно непохожий на спектральные методы. 

Условия ВЭЖХ разделения. Что такое хроматографическая система. «Химические» и «технические» параметры разделения.

3.2. Неподвижные фазы (НФ) для ВЭЖХ

Различные типы адсорбционных материалов для изготовления неподвижных фаз для ВЭЖХ. Различные типы архитектуры неподвижных фаз для ВЭЖХ. Способы синтеза различных химических вариаций НФ (stationary phase chemistries). Прививки (bonding), смешанные прививки, эндкеппинг (end-capping).

USP L-классификация НФ для ВЭЖХ как формализм для описания видов химий НФ, не имеющий значительного прикладного значения.

3.3. ВЭЖХ колонка

Закон Ван-Деемтера; эффективность ВЭЖХ колонки. Закон Дарси; импеданс ВЭЖХ колонки.

Типоразмеры колонок. Классификация по диаметру ВЭЖХ колонки. Длина колонки и диаметр части адсорбента. Зачем нужны различные типоразмеры ВЭЖХ колонок. 

Качество адсорбционного материала (adsorption material). Качество упаковки колонки (packing), дефекты упаковки.  

3.4. Таргетные и нетаргетные ВЭЖХ разделения
Изократическое и градиентное элюирование, их различное назначение.  


4. ВЭЖХ режим 

4.1. ВЭЖХ режим и вид ВЭЖХ

Почему о ВЭЖХ режиме нельзя судить ни по составу подвижной фазы, ни по названию ВЭЖХ колонки. Почему ВЭЖХ режим может быть разным для разных аналитов в одном анализе.

Смешанные режимы: как это выглядит и работает.

Чем опасно доминирование обращенной фазы. Чем она хороша, и чем плоха. Зачем нужна гидрофильная (HILIC) и ионная (IC, IEC) хроматография.

4.2. Динамическое модифицирование
Динамическое модифицирование. Ион-парная и ион-парная обращенно-фазовая ВЭЖХ.

4.3. Хиральная жидкостная хроматография
Хиральная полость (chiral cavity), трехточечное распознавание. Типы хиральных селекторов. Основные режимы и закономерности.


5. Современное состояние метода ВЭЖХ и рынка ВЭЖХ

5.1. Бренды, марки, производители ВЭЖХ колонок 

Бренды по поколениям, проблема «смены поколений», как с ней справляются производители. Проблемы внедрения наиболее современных и качественных ВЭЖХ колонок.
 
5.2. Аналоги ВЭЖХ колонок

Какие параметры хроматографирования должны быть схожи для признания ВЭЖХ колонки аналогом. Тестирование ВЭЖХ колонок в различных режимах. Воспроизводимость от партии к партии.

5.3. Проблемы современной ВЭЖХ

Как развивался ВЭЖХ, и что происходит сейчас. Стагнация современного рынка ВЭЖХ – в чем проблема? 

Отраслевые стандарты и критерии качества ВЭЖХ методик. Почему многие аттестованные ВЭЖХ методики на практике оказываются непригодными 

5.4. Нерешенные методологические проблемы ВЭЖХ

Проблема мифотворчества ВЭЖХ: от странных традиций до ошибочных концепций. Проблема ВЭЖХ терминологии и повседневного сленга.


6. Пробоподготовка для ВЭЖХ и ГХ

6.1. Пробоподготовка как вынужденная мера.  

Пробоподготовка как вынужденная мера. Баланс степени излечения и селективности извлечения. В каких случаях пробоподготовки можно избежать или хотя бы минимизировать

6.2. Задачи подготовки  

Основные задачи пробоподготовки. Совмещение ряда задач в одном этапе пробоподготовки как критерий экономической эффективности подхода к выполнению анализа

6.3. Модульная схема пробоподготовки и анализа 

Сложная методика анализа с пробоподготовкой как компьютерная программа или игра. Стратегия и тактика хроматографического анализа сложных объектов. Комбинирование традиционных и высокоэффективных способов пробоподготовки