День 1. Лекционная часть

Общие этапы разработки, модернизации и трансфера ВЭЖХ методик

1. Специфичность ВЭЖХ методики. Специфичность хроматографического разделения и специфичность детектирования.

2. Обзор способов детектирования в ВЭЖХ. Оптические, испарительные, электрохимические и масс-селективные детекторы, их специфичность и области применения. В каких случаях, и каким образом оптимизируют условия детектирования.

3. Классификация хроматографических методик согласно их назначению. Таргетные и нетаргетные методики. 

4. Основные параметры ВЭЖХ разделения. Факторы, определяющие разрешение пары пиков.

5. Оптимальное удерживание. Оптимальная селективность. Оптимальная эффективность.

6. Три общих этапа разработки, модернизации и трансфера ВЭЖХ методики.


ВЭЖХ режимы и неподвижные фазы

7. Базовые адсорбционные (RP, NP, HILIC, IC, CT, LEC) и эксклюзионные (SEC, IEX) режимы жидкостной хроматографии.

8. Смешанные режимы, часто применяющиеся при анализе фармацевтиков: RP/HILIC, RP/IC, RP/CT, RP/SEC, HILIC/IC, NP/CT.

9. Прогнозирование хроматографического поведения соединения в каждом из хроматографических режимов по его структурной химической формуле.

10. Обзор коммерчески доступных неподвижных фаз для ВЭЖХ. Типы коммерчески доступных неподвижные фаз для обращенно-фазовой, гидрофильной, ионной и хиральной ВЭЖХ. Эволюция неподвижных фаз для ВЭЖХ. Основные производители неподвижных фаз для ВЭЖХ. Структура современного рынка ВЭЖХ колонок


Закономерности основных ВЭЖХ режимов

11. Обращенно-фазовый (RP) механизм удерживания. Регулирование удерживания и селективности в обращенно-фазовом режиме. Преимущества и недостатки обращенно-фазовой хроматографии.

12. Нормально-фазовый (NP) и гидрофильный (HILIC) механизмы, их сходства и различия. Преимущества и недостатки нормально-фазовой хроматографии. Регулирование удерживания и селективности в нормально-фазовом режиме и гидрофильном (HILIC) режимах.

13. Ионный (IC) механизм удерживания. Регулирование удерживания и селективности в ионном режиме. Преимущества и недостатки ионной хроматографии.


День 2. Лекционная часть

 Производительность и разрешающая способность

17. Теория скоростей и уравнение Ван-Деемтера. Гидродинамика ВЭЖХ колонки и закон Дарси. Как выбрать оптимальную длину колонки и диаметр частиц адсорбента. Как выбрать оптимальную скорость потока.

18. Внеколоночные факторы уширения пика.  Внеколоночные объемы ВЭЖХ оборудования и их влияние на хроматографическое разделение. Проблема с перегрузкой колонки количеством вещества в старых ВЭЖХ методиках. Химические причины уширения пика; химическая инертность неподвижных фаз как критичная характеристика, влияющая на асимметрию ВЭЖХ пиков.


Модернизация устаревших ВЭЖХ методик

19. Типичные ошибки, допускаемых при разработке ВЭЖХ методик. Типичные устаревшие подходы, которые не следует копировать при разработке новых / трансфере существующих ВЭЖХ методик.

20. Перевод градиентных методик в изократические. Перевод ион-парных методик в методики с ПФ без добавок. Перевод методик на традиционных НФ в более современные core-shell (поверхностно-пористые).

21. Улучшение технических характеристик ВЭЖХ методик.


Трансфер ВЭЖХ методик

21. Причины неудач при трансфере изократических и градиентных ВЭЖХ методик. Практические рекомендации к действию при проблематичной валидации.

22. Выбор ВЭЖХ колонки, «аналогичной данной», в обращенно-фазовой ВЭЖХ.

23. Выбор ВЭЖХ колонки, «аналогичной данной», в гидрофильной (HILIC) и ионной ВЭЖХ (органических соединений).